Identificación molecular mediante secuenciación y PCR Multiplex del pez vela (Istiophorus platypterus: Istiophoridae) en Costa Rica.

Álvarez-Vega, Mary Cruz

2011

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En Costa Rica se ha estipulado legislación que protege al pez vela (I. platypterus) al prohibir la pesca comercial y la exportación del mismo. A pesar de ello, se cree que en los últimos años se ha dado una exportación ilegal de esta especie, situación que no se ha logrado comprobar, debido a que la metodología convencional presenta limitaciones para la identificación del producto pesquero. Por lo tanto, el presente estudio tuvo como objetivo la estandarización de dos metodologías alternativas que permitan una identificación más exacta de las especies de picudos de importancia económica en Costa Rica. La secuenciación del gen mitocondrial que codifica para la subunidad I de la enzima citocromo c oxidasa permitió la identificación de las muestras como I. platypterus, Kajikia sp., M. nigricans, X. gladius y Thunnus sp. Análisis filogenéticos demostraron que el gen COI no es apto para la identificación de algunas especies de picudos pues no logra diferenciar entre los peces aguja T. angustirostris y T. pfluegeri ni entre marlín rosado (K. audax) y marlín blanco (K. albida), sin embargo, esta distinción no es necesaria en el mercado costarricense. Así mismo, se estandarizó un PCR multiplex para la amplificación de fragmentos específicos de la región control del ADN mitocondrial, lo cual permitió la identificación de las especies o géneros de interés: I. platypterus, Kajikia spp., X. gladius y Thunnus sp. De esta manera, el presente estudio demuestra que los métodos moleculares pueden ser utilizados para la identificación fiable de los peces de pico. ____________________________________________________________________ ABSTRACT Costa Rican legislation has stipulated the protection of sailfish (I. platypterus) by prohibiting the commercial fishery and exportation of this species. However, it is suspected that in the last few years illegal exportation of sailfish has been occurring, fact that cannot be demonstrated due to the limitations of the conventional methods used for species identification once the product has been processed. This is why the objective was to standardize two alternative techniques that allow a specific identification of the economically important billfishes in Costa Rica. The analysis based on the mitochondrial cytochrome c oxidase subunit I (COI) gene sequences identified the samples as I. platypterus, K. audax, M. nigricans, X. gladius and Thunnus sp. Phylogenetic reconstruction demonstrated that COI gene does not differentiate unambiguously the species T. angustirostris and T. pfluegeri nor the species K. audax and K. albida, nevertheless this distinction is not important in Costa Rican market. Also, the multiplex PCR assay standardized to amplify specific fragments of the mitochondrial control region allowed the identification of the species: I. platypterus, Kajikia sp., X. gladius and Thunnus sp. This study reveals that genetic identification can be used as a reliable tool for the identification of billfishes.

Proyecto de Graduación (Bachillerato en Ingeniería en Biotecnología). Instituto Tecnológico de Costa Rica, Escuela de Biología, 2011.

Mitochondrial DNA; Genetic identification; ADN mitocondrial; Identificación molecular; PCR multiplex; COI; Istiophorus platypterus;