Serina proteasas de Lachesis stenophrys y Bothrops asper: producción de anticuerpos mediante inmunización con ADN y subclonaje

Madrigal-Villalobos, Marvin

2006

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Proyecto de Graduación (Bachillerato en Ingeniería en Biotecnología) Instituto Tecnológico de Costa Rica, Escuela de Biología, 2006.

El veneno de vipáridos contiene componentes tóxicos de naturaleza enzimática, dentro de los cuales se destacan serina proteasas por su contribución a provocar un desbalance del sistema hemostático. La baja proporción de anticuerpos especá­ficos para neutralizar toxinas de interés dentro de los sueros antiofí­dicos producidos de forma convencional, ha llevado a la obtención de los ADN codificantes para diversas toxinas y su clonación en vectores de expresión, con el fin de producir anticuerpos específicos mediante inmunización con ADN. En esta investigación, se inmunizaron ratones ví­a intravenosa con el ADN codificante para una serina proteasa del veneno de Lachesis stenophrys clonado en el plásmido pCI, y se realizó un subclonaje de una serina proteasa del veneno de Bothrops asper en el vector de expresión eucariota: pVAX1-UbC. Tras determinar el nivel de IgGs específicas para la serina proteasa de L. stenophrys en el suero de ratones inmunizados,se determiná la ausencia de una respuesta inmune específica mediante inmunización intravenosa, lo cual evidencia la necesidad de buscar nuevas estrategias para optimizar los constructos de ADN a ser utilizados. El subclonaje realizado constituye una de ellas, con el fin de estudiar a futuro el efecto regulador de un promotor muy conservado en mamí­feros(el gen de la Ubiquitina C) sobre la expresión de la serina proteasa de B. asper.

BIOT; BIOL; ADN; Ratones; Serpientes; Viperidae; Lachesis; Bothrops; Venenos; Inmunización;