Aislamiento y caracterización de myxobacterias a partir de muestras ambientales de Costa Rica

Moreira-Soto, Rolando

2009

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Proyecto de Graduación (Bachillerato en Ingeniería en Biotecnología) Instituto Tecnológico de Costa Rica, Escuela de Biología, 2009.

Las myxobacterias son un grupo de bacterias gram negativas, con características muy distintas con respecto a las demás bacterias. Estas producen una estructura multicelular llamada cuerpo fructífero, no producido por ningún otro tipo de bacterias, y la gran importancia de este grupo radica en que, producen gran cantidad de metabolitos secundarios, los cuales, en muchos casos son compuestos nuevos y con características promisorias, para la búsqueda de nuevos fármacos y antibióticos, incluso se habla de compuestos con posible actividad anti cáncer. El aislamiento de estas bacterias se reporta como de gran complejidad, lo cual, ha limitado la investigación de este grupo. El objetivo del presente estudio fue evaluar metodologías para aislamiento e identificación general de myxobacterias a partir de muestras ambientales de Costa Rica. Se probó 4 métodos de aislamiento, y se tuvo que utilizar una concentración de antibiótico mayor a la reportada, debido a la rápida contaminación. Como resultado de esta investigación, se lograron aislar 19 cepas puras de myxobacterias y 1 cepa de Herpetosiphon, en 3 meses aproximadamente, lo cual es un tiempo corto según lo que se ha reportado, y además de esto se identificaron las mismas molecularmente con ayuda de las bases de datos. Los métodos del medio WCX con E. coli, y del suelo con estiércol de conejo dieron los mejores resultados. Con el método de papel de celulosa se da el crecimiento de myxobacterias difíciles de purificar, por lo que fue el menos efectivo junto con el método de cámara húmeda (posiblemente por incubarse a temperatura ambiente). Todos los aislamientos obtenidos pertenecen al suborden Cystobacterineae, lo que se explica porque estas crecen más rápido que los otros subórdenes y se purifican más fácilmente. Los aislamientos se encontraban en 3 géneros, y esta poca diversidad obtenida evidencia la dificultad que conlleva la fase de purificación, siendo esta más fácil en los géneros Myxococcus y Corallococcus, que fueron la mayoría obtenida en este estudio. La morfología observada en los cuerpos fructíferos, y en los biofilms producidos en la placa, difiere entre cepas de la misma especie, lo que evidencia que la clasificación basada en características morfológicas es muy difícil, y en ciertos casos se producen cambios en el cultivo, y esto lleva a errores en la clasificación. Al analizar las secuencias del ADNr 16S, se observa que este grupo tiene gran semejanza en cuanto a esta región, y no se permite una separación clara de las especies por medio del porcentaje de identidad, ya que las especies de algunos géneros no se logran separar inclusive al 99%. Para la correcta separación genética de las especies de este grupo de bacterias, se deberán hacer análisis tomando en cuenta otros genes.

Myxobacterias; Cuerpo fructífero; BIOT;