Detección Molecular de Helicobacter pylori

López-Cascante, Gustavo Alonso

2009-06-17T21:02:36Z

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Proyecto de Graduación (Bachillerato en Ingeniería en Biotecnología). Instituto Tecnológico de Costa Rica, Escuela de Biología, 2007.

Helicobacter pylori, un microorganismo gramnegativo, microaerofílico y flagelado, es considerado uno de los factores causales más importantes de trastornos gástricos, en especial el desarrollo de cáncer gástrico, y se ha sugerido como reservorio las fuentes de agua para consumo humano. Debido a la dificultad en su cultivo, se ha recurrido a las técnicas moleculares, en especial, la técnica de PCR para su diagnóstico, principalmente cuando ha sido analizado a partir de aislamientos ambientales. En este Trabajo se evaluaron protocolos de PCR para la detección de las regiones ARNr 16S, glmM, ureA, cagA y vacA en cultivos bacterianos aislados y cultivados a partir de varias fuentes de abastecimiento de agua en Costa Rica. El ADN de las muestras fue extraído mediante el Kit Wizard® de PROMEGA, el cual resultó ser un kit eficaz en la purificación del ADN genómico de las mismas. Los protocolos de PCR evaluados fueron específicos para la detección de ADN de H. pylori. Los protocolos para las regiones glmM y ureA permitieron la identificación de H. pylori en las muestras ambientales valoradas. Debido a la generación de productos inespecíficos, no se logró definir el genotipo vacA de una de las muestras ambientales. Se puede concluir que los métodos desarrollados en este Trabajo se pueden utilizar como alternativa para la detección de ADN de H. pylori en muestras aisladas de fuentes de agua. Se recomienda una mayor optimización de los mismos para la valoración de cepas de distintas procedencias, en especial, de origen ambiental. Asimismo, se recomienda complementar la identificación molecular de H. pylori en cepas ambientales con otras técnicas microbiológicas y/o bioquímicas para confirmar el resultado obtenido.

Helicobacter pylori; Wizard; ARNr 16S; GlmM; AureA; CagA; VacA; BIOL;